用admax腺病毒作载体将il-24基因介导到人体,对肿瘤细胞进行基因治疗的方法。
腺病毒载体系统一般应用人类病毒作为载体,以人类细胞作为宿主,因此为人类蛋白进行准确的翻译后加工和适当的折叠提供了一个理想的环境。大多数人类蛋白都可达到高水平表达并且具有完全的功能。
腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞,因此在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。特别需要指出的是:腺病毒具有嗜上皮细胞性,而人类的大多数的肿瘤就是上皮细胞来源的。因此,腺病毒载体系统具有靶向性,使其可以靶向特定的组织或细胞内复制增殖,表达目的基因,直接作用于病灶,抑制肿瘤细胞生长,诱导其调亡。
(3)、 admax腺病毒表达载体具有构建简单,出毒快,单细胞病毒产量高等特点 。
admax腺病毒系统是由腺病毒载体鼻祖dr. frank graham在1999年创建的一套重组腺病毒构建系统,该系统基本原理是通过cre-loxp或flp-frt重组酶,使共转染到293细胞中的腺病毒载体穿梭质粒和辅助质粒(腺病毒基因组质粒)在重组酶的作用下产生重组腺病毒。得到的重组病毒是e1/e3缺失的复制缺型腺病毒。与目前使用最普及的adeasy系统相比,有一定的优势:admax系统只需要2~4周就能完成从质粒构建到重组出毒,成功率大于98%(其中95%的克隆含有目的基因),因在真核细胞内重组出毒,保持了对腺病毒的生存压力,有助于重组腺病毒的基因组的完整性;而adeasy系统的出毒成功率只有18-34%(stratagene公司新版的adeasy xl系统成功率在94%左右),且在原核细胞(bj5183)中完成病毒基因组重组,理论上,失去了生存压力的腺病毒基因组更容易发生突变,病毒遗传背景及活性可能会受到影响。
人才、资源和产业方面的特色优势:
本单位是山东省科技厅认定的高
1、有研究开发基因药物的专业机构--生物技术研究所。配备有较完善的科研生产检测仪器和设备(dna合成仪、pcr扩增仪、70l贝克曼的发酵罐、发玛西亚的蛋白层析系统、waters的高效液相、万级净化级别的实验室等)。
2、拥有一支经验丰富、老中青相结合的科研队伍。已开发出的国家级新药“重组人白细胞介素-2(125ser)”和“重组人粒细胞集落刺激因子”,并已获得国家药品监督管理局颁发的新药证书和批准文号,现已投放市场。
3、有一座4000m2的gmp标准的生物药品生产车间(gmp证书编号:c1094),年生产药品能力可达千万支。
4、有完善的科研协作网络。我单位与“美国俄亥俄州立大学分子生物学中心”、“中国协和医科大学”、“山东大学药学院”等国内外大专院校和科研院所有紧密合作关系。本项目是与中国协和医科大学共同合作研究的科研项目。
5、我单位科研工作经验丰富,承担过省、市、区级科研项目多项。
上述条件,为“重组人白细胞介素-24腺病毒注射液”的研制奠定了基础。
四、应用或产业化前景、市场需求
人白细胞介素-24(il-24)是目前发现的唯一能即抑制肿瘤细胞生长又表达刺激免疫系统的具有双重功效的蛋白基因。研究表明,借助腺病毒表达载体,将人白细胞介素-24基因转染肿瘤细胞,可特异性抑制肿瘤细胞生长,诱导其调亡,但不会影响正常细胞。il-24的这种作用在至少50余种人类恶性肿瘤细胞实验中得到证实,包括黑色素瘤
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