性的聚集体都不会诱导la的聚集。经鉴定r-la和蛋白聚集体之间的相互作用本质上是疏水相互作用。以前的工作表明分子伴侣识别r-la,李剑的工作揭示了处于“前熔球态”的牛乳清白蛋白不仅是分子伴侣而且也是蛋白聚集体的识别对象,说明生物大分子之间相互作用的构象基础。
大分子拥挤对6-磷酸葡萄糖脱氢酶和蛋白质二硫键异构酶复性的影响
蛋白质体外折叠的研究已经为人们熟悉细胞内新生肽链的折叠提供了大量的信息。为了避免伴随蛋白质去折叠和折叠过程中的聚集干扰研究,或为了通过基因工程得到可溶性蛋白,研究通常是在简单组成的缓冲液体系中进行,所用蛋白的浓度一般较低。可是细胞内的实际情况完全不是如此。所有的细胞中都存在着大量的蛋白质、核酸、
多糖等各种生物大分子,总浓度高达50-400g/l,它们大约占用细胞容积的20-30,因此任何一种大分子都处于一个布满其他大分子的拥挤环境中。对源于排斥容积效应的拥挤理论分析表明它对所有大分子之间的反应在热力学和动力学上都有很大的影响。可是以往人们在体外研究生物大分子的性质和相互作用时几乎都忽略了这样一个细胞大分子拥挤的实际环境。最近几年建议把大分子拥挤与ph、离子强度和溶液组成等一样作为常规因素来研究生物大分子的呼声很高,然而“拥挤”对蛋白质折叠影响的实验研究目前还是处于初步阶段。李剑及时开展了向复性体系添加高浓度的多糖,聚乙二醇和蛋白拥挤试剂以模拟细胞内环境,研究大分子拥挤对变性6-磷酸葡萄糖脱氢酶和蛋白质二硫键异构酶复性的影响。
李剑发现,随着蛋白复性时浓度的升高,两种蛋白复性过程中的聚集明显增加,复性产率降低。在高浓度的拥挤试剂存在时,选定浓度的蛋白的复性产率保持不变但速率降低。非凡是当拥挤试剂存在时,6-磷酸葡萄糖脱氢酶的复性动力学由一相一级反应变为由快慢两相构成的两相一级反应,而且其慢相的比例随拥挤试剂浓度的增加而增大。分子伴侣groel不仅能够大大提高6-磷酸葡萄糖脱氢酶的复性产率,而且能够使它的复性动力学从两相逆转回到一相,从而加速整个复性的进程。对比其他实验室的工作,李的结果揭示了大分子拥挤环境对蛋白质折叠的热力学和动力学影响的复杂性和多样性。
金属离子对金属硫蛋白参与氧化还原反应的调控
金属硫蛋白(mt)是一种非常非凡的含高达30%半胱氨酸,却没有二硫键和芳香氨基酸的小分子蛋白。所有半胱氨酸在序列中保守,并结合各种金属离子,一个分子可结合7个二价离子或是11-18个一价离子。近年来mt的发现者vallee报导了细胞内的氧化还原电位调控mt中锌离子释放和结合的新的性质。我们提出了一个与此观点相反的观点,认为细胞内大量的mt是否可能通过锌离子的结合和释放反过来调节其巯基的反应性,从而调控整个细胞内的氧化还原电位呢。以往虽然也有人曾经设想过,但一直没有实验证据。在该实验室有关蛋白二硫键异构酶(pdi)催化性质研究的基础上,李剑与张森一起发现mt像谷胱甘肽、二巯基苏糖醇一样,也能影响pdi催化的巯基磺酸化的核糖核酸酶a(rnasea)形成天然核糖核酸酶a。利用这一反应他们发现mt在金属螯合剂edta存在时,能够提高rnasea的复性产率;但edta与谷胱甘肽或二巯基苏糖醇共存对rnasea复性无影响。表明edta确能通过鏊合锌离子使mt代替谷胱甘肽、二巯基苏糖醇充当体系中的还原剂。进一步又证实edta确能通过鏊合锌离子而增加mt的巯基同巯基试剂5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoicacid的反应性。实验结果表明mt确实可以通过锌离子的结合和释放来调节其巯基
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